1、真空手套箱分為主箱體和過渡室兩部分。主箱體不能抽真空，過渡室則可以單獨抽真空。
　　2、先將手套套入手套孔上,再用喉箍將其固定,如果條件允許,最后在手套的外圍加一圈與喉箍相同寬度的橡膠圈(或片),這樣可以防止手套被勒破,延長手套的使用壽命。
　　3、將實驗所需用的儀器及設(shè)備從過渡室放置并轉(zhuǎn)移到主箱體內(nèi),較大設(shè)備需要從主箱體開門的一側(cè)放入,另外放入適量的實驗樣品用作箱體環(huán)境的測試。
　　4、在主箱體充氣結(jié)束后,即主箱體達(dá)到了實驗所需環(huán)境,關(guān)閉主箱體進出氣口,打開過渡室外門,將實驗所用材料放入過渡室后關(guān)閉外門,以達(dá)到和主箱體相同的實驗環(huán)境。
　　5、此時打開過渡室內(nèi)門,將過渡室內(nèi)的實驗材料取放到主箱體內(nèi),開始實驗操作.操作時關(guān)閉過渡室內(nèi)門。
　　6、實驗結(jié)束后先打開過渡室內(nèi)門,將實驗結(jié)束后的材料放入過渡室,關(guān)閉過渡室內(nèi)門,然后打開過渡室外門,將實驗材料取出.關(guān)閉過渡室外門,實驗操作結(jié)束。
　　7、關(guān)閉主箱體,過渡室所有開門及閥門,將惰性氣體瓶接入手套箱進氣閥門,先打開手套箱主箱體進氣閥門,然后緩緩打開惰性氣體瓶閥門,慢慢往主箱體內(nèi)充氣,此時根據(jù)手套的鼓漲程度還確定是否需要打開手套箱另一側(cè)的排氣孔,此時可以試著將手套帶在手套往箱體內(nèi)擠壓,由于這種方法一兩次內(nèi)可能無法達(dá)到實驗所需要的環(huán)境,所以建議多重復(fù)幾次,期間可以實驗樣品來測試是否達(dá)到了實驗所需要的環(huán)境。